如何检测乳酸菌饮料中的乳酸菌含量？-凯发k8旗舰厅

我们平时喝的酸奶、乳酸菌饮料都含有个关键成分——乳酸菌。能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的有益菌，广泛存在于人体的肠道中，大部分是具有改善肠道消化功能的作用。那你知道如何检测乳酸菌饮料中的乳酸菌含量吗？

如何检测乳酸菌饮料中的乳酸菌含量？

一、样本采集

检样主要为含乳酸菌活菌的饮料和微生态制剂，样本应放入冰箱保存，心快检验。

二、检验方法（中华人民共和国国家标准  乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验gb／t 16347-1996）

乳酸菌菌总数的测定：乳酸菌菌落总数是指标样在一定条件下培养后，所得1ml检样中所含乳酸菌菌落的总数。

（一）检验程序

乳酸菌菌落总数检验程序如下：

（二）培养基和试剂

改良tja培养基（改良番茄汁琼脂培养基）；改良mc培养基（modified chalmers培养基）；0.1％亚甲蓝牛乳培养基；6.5％氯化钠肉汤参照；ph9.6葡萄糖肉汤；40％胆汁肉汤；淀粉水解培养基；精氨酸水解培养基；乳酸杆菌糖发酵管；七叶苷培养基；革兰氏染色液；3％过氧化氢溶液；蛋白胨水、靛基质试剂；明胶培养基；硝酸盐培养基、硝酸盐试剂；生理盐水：定量分装于三角瓶和试管内灭菌。

（三）操作步骤

1．以无菌操作将经过充分摇匀的检样25ml（或25g）放入含有225ml灭菌生理盐水的来菌广口瓶内做成1：10的均匀稀释液。

2．用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1m，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液）。

3．另取1ml灭菌吸管，按上述操作顺序，作10倍增稀释液，如此每递增一次，即换用1支1ml灭菌吸管。

4．选择2～3个以上适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。

5．稀释液移入平皿后，应及时将冷至50℃的乳酸菌计数培养基（改良tja或改良mc）注入平皿约15ml，并转动平皿使混合均匀。同时将乳酸菌计数培养基倾入加有1ml稀释液检样用的灭菌生理盐水的灭菌平皿内作空白对照，以上整个操作自培养物加入培养皿开始至接种结束须在20min内完成。

 6．待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃±1℃温箱内培养72h±3h取出，观察乳酸菌菌特征，选取菌落数在30～300之间的平板进行计数。计算后，随机挑取5个菌落数进行革兰氏染色，显微镜检查并做过氧氢酶试验。革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，无芽胞的球菌或杆菌可定为乳酸菌。根据证实为乳酸菌菌落计算出皿内的乳酸菌数，然后乘其稀释倍数即得每亳升样品中乳酸菌数。例如，检样10－4的稀释液在改良tja琼脂平板上，生成的可疑菌落为35个，取5个鉴定，证实的乳酸菌的4个，则1ml检样中乳酸菌数为：

35×4／5×104＝2.8×105

7．乳酸菌在改良tja和改良mc培养基上菌落生长形态特征。

（四）乳酸菌的鉴定

对上述分离到的乳酸菌需进行菌种鉴定时，则作以下试验。

1．菌种制备  自平板上挑取菌落，接种于改良tja或改良mc琼脂斜面，于36℃±1℃，24～48h培养，刮取菌苔，分别进行下列试验。

2．乳酸杆菌鉴定试验  极少见还原硝酸盐，不液化明胶，不产生靛基质和硫化氢。

3．常见乳杆菌属内种的碳水化合物反应。

4．产酸乳的链球菌的鉴别试验。