乳酸菌饮料中的大肠杆菌怎么检测？检测方法有哪些？-凯发k8旗舰厅

大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。那乳酸菌饮料中的大肠杆菌怎么检测？检测方法有哪些呢？

乳酸菌饮料中的大肠杆菌怎么检测？

(一)检验方法

1．乳糖发酵试验。以无菌操作采取样品，采取量及稀释倍数，依据国家或当地卫生标准要求及样品污染情况而定。将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在l m j以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，lm1及1mi以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±l℃温箱内，培养24±2小时，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性；如有产气者，则按下列程序进行。

2．分离培养。将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±l℃温箱内，培养18～24小时，然后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色和证实试验。

3．证实试验。在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落l～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃ 温箱内培养24±2小时，观察产气情况。凡乳糖管产气，革

兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。

4．报告。根据证实为大肠菌群阳性的管数，查mpn检索表，报告每l 00ml(g)大肠菌群的最可能数。

(二)培养基

①乳糖胆盐发酵培基

成分：蛋白胨：20g、猪胆盐(或牛，羊胆盐)：5g、乳糖:10g、0．04％溴甲酚紫水溶液: 25m1、蒸馏水: 1 000m1

制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正ph，加入指示剂，分装每管l 0ml，并放入一个小倒管，高压灭菌115℃15分钟。

附注：双料乳糖胆盐发酵培基除蒸馏水外，其他成分加倍。

用途：乳糖发酵试验用。

原理：细菌分解糖类是依靠细菌细胞所产生的各种酶类的作用，细菌产生的分解糖类的酶，随细菌种类不同而异，可以此来鉴别细菌。

乳糖是双糖，细菌分解双糖的酶大多是胞外酶。乳糖被乳糖酶水解成葡萄糖和半乳糖，葡萄糖可直接被细菌利用，而半乳糖则需在细胞内转化为葡萄糖后再被利用。

糖发酵试验主要是测定细菌分解糖类以后所产生的酸，以培基ph降低(指示剂变色)作为观察结果的指标。

大肠杆菌等细菌在酸性环境中，由于甲酸脱氢酶的作用，可使甲酸分解成co2和h2，在培基中产生大量气体，进入倒管中，以便观察。

注：常用于供发酵试验的各种糖类、醇类和糖苷类(见表3-1)

②伊红美蓝琼脂培基

成分：蛋白胨 10g、乳糖 10g、磷酸氢二钾 2g、琼脂 17g、2％伊红y溶液 20ml、0．65％美蓝溶液 10ml、蒸馏水 1000ml、ph7.1

制法：将蛋l白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正ph，分装于烧瓶内，高压灭菌121℃15分钟备用。临用时加入乳糖，并加热溶化琼脂，冷至50一55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。

原理：大肠菌群细菌发酵乳糖产酸，使伊红与美蓝结合而成黑色化合物，故菌落呈黑紫色，有时还可产生金属光泽。黑色程度与光泽产生情况与伊红、美蓝二者比倒有关。不发酵乳糖的细菌(如沙门氏菌、志贺氏菌)则为无色菌落。

③乳糖发酵培基

成分：蛋白胨 20g、乳糖 10g、o．04％溴甲酚紫水溶液 25ml、蒸馏水 1000ml、ph7．4

制法：将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正ph，加入指示剂，按检验要求分装30ml、10ml或3ml，并放入一个小倒管，高压灭菌115℃15分钟。

附注： (1)双料乳糖发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。(2)30ml和10ml乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用．3ml乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。

4．蛋白胨水

成分：蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g、氯化钠 5g、蒸馏水 1 000ml ph7．4